前言：血红蛋白作为生物体内红细胞中的一种机能蛋白，生物体的各种生命活动都离不开血红蛋白发挥出的作用，它有效起到了传输氧气/传递电子以及分解二氧化氢的作用。血红蛋白的检测是临床检测的一项重要内容，要运用合理的检测方法，高效分析出血红蛋白的实际情况，从而满足血液的需求。

血红蛋白检测作为生物医学界的热点研究内容，受到了越来越多的重视和关注。血红蛋白本身是一种重要的生物大分子，高等生物体的生命活动过程离不开血红蛋白的作用。为了化满足血液的需求，就必须积极开展对血红蛋白类“人工血液”的研究分析，运用先进的检测方法，例如被广泛应用的荧光法、电化学法以及光度法，通过结合血红蛋白的实际特点，有针对性的展开检测方法实践应用探讨。

电化学法在血红蛋白检测中的应用

电化学法的优势在于其高效、实时以及适宜微量检测，这些特点有利于展开对血红蛋白的检测分析。不过由于血红蛋白自身的体积结构较大，容易造成钝化电极现象，从而影响血红蛋白对电化学信号的接收，容易对检测数据产生偏差。好在研究人员已经对电极进行了一系列的改进工作，极大提高了血红蛋白的电极反应。

1.运用Hb的类酶作用的电化学检测

Hb的内部结构与HRP存在着类似的活性基因，从而证明Hb也具备了酶催化活性和过氧化物酶特征。因此，血红蛋白检测可以通过运用Hb催化反应作用对其进行测定实验。如在Hb的催化活性作用下，有效创新设计出了电化学分析测定Hb的方法，通过利用Hb催化二氧化氢同时氧化邻联茴香胺的氧化反应，利用线性扫描二阶导数极谱法测定催化反应的产物，在测定过程中可以清晰发现反应产物会在处形成一个峰形良好的极谱还原峰，工作人员可以有效根据峰电流的实际大小测定出Hb的含量。

2.电合成检测方法

通过运用电合成方法于玻碳电极面制备出聚硫堇薄膜，同时采用石英子微天平和电化学方法分析其对血红蛋白的吸附作用。在吸附作用下血红蛋白能够有效发生电化学反应，血红蛋自的含量会与氧化还原电流呈现出正比例关系，从而证明出其可以用在血液中血红蛋白的含量测定试验。

光度法在血红蛋白检测中的应用

光度法的应用原理是通过在血红蛋白和某些试剂相互反应而产生可以稳定存在的显色物质，研究人员对显色物质在某一特定波长下对光的特征吸收进行分析，能够准确计算出血红蛋白的实际含量。

1.氧合血红蛋白法

通过利用氧合血红蛋白法，有效把血红蛋白转化为氧合血红蛋白，合理使用血细胞的计数设备获得血红蛋白的浓度。氧合血红蛋白检测方法的优点在于其安全稳定性，然而在实际操作过程中，该方法容易受到外界因素的影响，无法将高铁血红蛋白有效转化为氧合血红蛋白，从而一定程度上限制了其发展。

2.氰化高铁法

在氰化高铁的作用下，血红蛋自会与铁氰化钾反应生成高铁血红蛋自，然后与氰化钾反应生成氰化高铁血红蛋白。我们可以看出氰化高铁血红蛋白呈现出红色，状态较为稳定，将其放在540nm波长下，通过使用分光光度法测定其光密度，对比实际测出的光密度与标准品的光密度，最终获得准确的血红蛋白含量。氰化高铁法获得世界卫生组织和国际血液标准化委员会的认可，将其当做血红蛋白测定的标准化参考方法，具体化学反应式如下所示：Hb+K3Fe (CN) 6&rarr；Hi：Hi+CN-&rarr；HiCN。

3.氧化法

由于Hb中含有一定数量的亚铁血红素，其能够使邻-甲联苯胺氧化呈现出蓝色状态，在酸反应后呈现出黄色，吸收峰维持在435nm，通过检测不一样浓度的标准血红蛋白和邻-甲联苯胺反应后的吸光度，从而最终明确出氧化法的线性范围。接着去除线性范围内的低、中、髙和最低4个血红蛋白浓度的样品各6份，通过采取测定其回收率明确定量限。邻-甲联苯胺法的最大优点就是方便简捷、科学准确，能够适用于牛血清中的血红蛋白含量检测。

荧光法在血红蛋白检测中的应用

前述讲过血红蛋白的内部结构与HRP存在着相似的特点，因此血红蛋白具备类似过氧化酶的催化活性。能够将其作为过氧化物的模拟酶，合理选择出一种适宜的酶催化氧化底物，可以让两种在特定的条件下发生充分的反应，然后运用荧光法对反应产物进行分析，科学计算出血红蛋白的浓度。

通过研究分析，使用表而活性剂十六烷基三甲基溴化铵和Zn2+对血红蛋白的荧光强度有显著的提升作用，采用荧光光谱法可以有效定虽出人体血清中的实际血红蛋白。

基于血红蛋白的过氧化物酶活性，根据催化过氧化氢氧化对甲基酚的反应体系，发现表面活性剂SDS对该体系反应速率有显著的增强反应，从而有效研究设计出了高灵敏测定Hb的催化荧光分析法。基于1.5×10-3 mol/LSDS 调价下，测定Hb的线性范围为：l×10-9〜8×10-8mol/ L，检出限为：3.4×；10-10mol/L，适用在尿中的Hb测定，能够获得较好的检测效果。针对其对甲基酚存在一定的毒性，因此研究者又设计出了以EBT作为其氢供底物时的酶动力学行为，有效建立了测定血红蛋白的催化动力学光度法。

参考文献：

1.无氰化物测定血红蛋白的方法研究m.分析科学学报, 2013, 19 (2)：127-129.

2.基于血红蛋白的过氧化物酶特性测定其在血浆中游离态含量 [J].分析化学研究简报，2014, 31 (8> :945-949.

3.在四平基氯化铵促进下血红蛋白在裸银电极上的电 化学行为及分析应用⑴.分析化学，2013, 24 (11) : 1281-1283.